金属蛋白酶ADAM15在剪切应力作用下上调，促进内皮细胞存活

血流紊乱所引起的剪切应力降低，将会损害内皮完整性，促进血管炎症病变的发展。今天，和大家分享的实验是金属蛋白酶ADAM15在剪切应力作用下上调，促进内皮细胞存活。

小编分享的内容主要来自国外的一篇名为《The metalloproteinase ADAM15 is upregulated by shear stress and promotes survival of endothelial cells》的研究报告。

ADAM家族的金属蛋白酶已参与细胞存活和炎症反应的调节。当内皮细胞受到生理剪切应力时，ADAM家族内ADAM15mRNA最显著上调(4倍)。这种诱导作用在静脉、动脉和微血管内皮细胞中得到证实，并与ADAM15蛋白在细胞裂解液中(5.6倍)和细胞表面(3.1倍)的表达增加有关。ADAM15启动子含有转录因子KLF2的多个一致位点，也受到剪切应力的上调。

研究介绍

内皮细胞不断暴露于血流，会导致内皮表面层流剪切应力。

内皮表面的剪切应力在大动脉和小动脉或静脉中明显不同。

内皮细胞对血管系统中流动条件减少的病理反应与转录变化有关。

解整合素和ADAM（金属蛋白酶）家族成员与各种内皮细胞功能有关。

实验方法

慢病毒转导：使用MISSION®shRNA进行系统短发夹RNA的慢性病毒转导。对于ADAM15敲低。并对pLKO.1puro质粒进行编号。

流式细胞分析：以添加0.2% BSA的PBS作为检测缓冲液染色过程的步骤在4°C下进行。HUVECs是通过小鼠孵育分析ADAM15的表达抗ADAM15单克隆抗体(5 μg/ml)与apc偶联的抗小鼠抗体(1:200)。

细胞凋亡测定：10ng /ml TNF和10ng /ml TNF均可诱导细胞凋亡，用无血清培养基去除生长因子培养24小时，然后用三种不同的方法确定Tosis。对最终点分析，对于live-cell成像后，细胞用fitc标记的annexin V在Hanks中孵育缓冲盐溶液(HBSS)， 30分钟以绿色荧光区域的比例确定相对凋亡和总的细胞面积在至少8个图像为每一条件使用。

总结

1.剪切应力上调内皮ADAM15表达。

人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在静态或者不同流动条件下培养。在流动条件下的内皮细胞获得了细长的形状并在流动方向上对齐。

2.流体剪切应力引起的ADAM15上调涉及KLF2。

转录因子KLF2受剪应力诱导，负责调控大部分剪切应力敏感基因，实验证实，实验设置中，KLF2mRNA的表达是通过剪切应力调控的。

3.ADAM15缺失时炎症基因诱导和凋亡增强。

原文连接：http://sci-hub.ren//31271758/

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